PEI (Polyethylenimine) 转染细胞标准流程

适用于以下细胞系转染：HEK293, 293T/FT, N18TG2. （为实验室师姐分享的，如有侵权请告知删除，谢谢）

实验准备

1.细胞培养物：均匀分布于培养皿/板，生长至50-60%汇合。

2.无抗培养基：不添加任何抗生素的全培。

3.无血清基本培养基

4.1mg/ml PEI溶液：按此浓度用双蒸水配置PEI (linear 25kD, Polyscience, 23966) ，加入1M HCl 调节pH至中性（6.8-7.2，约18ul/ml），加热至65-70℃并维持5min（可以简短超声助溶）。0.22um滤膜过滤灭菌，分装后冻存于-20℃。避免反复冻融，解冻后可储存于4℃3-4周。

操作步骤

1.转染前一天按40%密度接种细胞至相应培养表面。

细胞接种量

24孔板 4*104/well

12孔板 6*10⁴/well

35mm dish 3*105/well

60mm dish 1*10⁶/well

2.      转染前，将全培更换为新鲜的无抗全培。

3.      制备DNA-PEI复合物：按DNA: PEI = 1:4 (m/m)比例混合DNA和1mg/ml PEI溶液，并添加优化培养基至适当体积，室温静止8-15min。。

4.      按相应体积将DNA:PEI复合物滴入细胞培养皿中，轻轻晃动培养皿，使复合物均匀分布。

5.      转染6-10小时后，将原有培养基吸除，加入新鲜全培。

6.      继续培养24-72小时后收集转染细胞样品检测。