【求助】做酶切连接后转化再提质粒,质粒明显变小,Why???
用XmaI,SacI分别切T载体和我的表达载体,切T可以切出目的片段,表达载体本来两个酶切位点中间有1000多的片段,用上述两个酶切也可以切出,将我的目的片段和表达载体回收,连接,转化,连续做了5,6次,有几次是不长菌,有三次都只长一个菌,但是提质粒,质粒大小明显变小,我的表达载体是10K多,只跑出一条3K的带,酶切鉴定的结果是切出两条带,一条3K多,一条5K以上的带,没有目的条带。。。。
首先涂板的抗性问题可以排除,是正确的。。。
连接转化也换过别人做,也是同样的结果。。
且有3次都是同样的长一个菌。。。提质粒酶切结果也是一样。。。
每次连接的载体和目的基因都是重新切的。。。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 4628