【求助】急急急！！！双酶切分离载体和目的片段
发布于 2011-03-27 · 浏览 2252 · IP 贵州贵州
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各位战友，救救小弟啊！
我想把一个目的基因连入载体PcDNA3.1(-)中，首先在目的基因的两端分别加入酶切位点Xba I 和 BamH I （保护性碱基和KOZAK序列都加了）后死活都得不到目的克隆。接着我用pMD19-T载体连接目的基因，通过测序后，阳性克隆是我要的东西，目的片段有了，两端加入的酶切位点（Xba I 和 BamH I）的序列也都是准确的。好了，问题来了。我再用Xba I 和 BamH I去切这个含有目的片段的T载，怎么也切不下来。得到的始终是一条带。（目的片度和T载体连接后的酶切位点顺序是这样的：从左到右 ...sal I-Xba I-目的条带-BamH I-Xba I-BamH I-Sma I... ）
不知道有没有哪位老师遇见过这种情况? 感激涕零。。。
我想把一个目的基因连入载体PcDNA3.1(-)中，首先在目的基因的两端分别加入酶切位点Xba I 和 BamH I （保护性碱基和KOZAK序列都加了）后死活都得不到目的克隆。接着我用pMD19-T载体连接目的基因，通过测序后，阳性克隆是我要的东西，目的片段有了，两端加入的酶切位点（Xba I 和 BamH I）的序列也都是准确的。好了，问题来了。我再用Xba I 和 BamH I去切这个含有目的片段的T载，怎么也切不下来。得到的始终是一条带。（目的片度和T载体连接后的酶切位点顺序是这样的：从左到右 ...sal I-Xba I-目的条带-BamH I-Xba I-BamH I-Sma I... ）
不知道有没有哪位老师遇见过这种情况? 感激涕零。。。
最后编辑于 2011-03-27 · 浏览 2252
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