【求助】转染后有mRNA没有蛋白表达
最后编辑于 2022-10-09 · IP 英国英国
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我在尝试转染某种细胞,载体是购买的商业载体(pCMV6),之前转染HEK293作为预实验,已经用WB证明有效,但是换到现在这种细胞之后就很奇怪,一开始想用短期转,结果WB做不出来,觉得可能是转染率太低,于是又改做稳定转染,用了G418筛选。花了近2个月,细胞稳定下来了,取样做RT-PCR,有相当强的mRNA表达(-RT和对照组转染也做了的,基本没有带,所以不会是污染),谁知做WB还是一点东西都没有……我都快疯了,既然能抗G418,又有大量mRNA,为什么还会没蛋白呢?细胞本身是有点太老了,已经100多代(汗),但之前师姐也用它做出了稳定转染,所以应该是可行的吧……
目前导师是建议用IP和免疫荧光看看能不能有点东西,但我觉得以那么强的mRNA表达,WB做不出来真的说不过去,怕之后的实验希望也不大……总之请大虾们指点一二,无论是原因分析还是后续补救都行,先深深谢过了!