提取细胞蛋白是否需要超声?Co-IP的细胞蛋白提取问题
不知道大家在提取293T细胞蛋白的时候有没有遇到过RIPA(强)加进去之后,cell lysis就像一坨鼻涕一样粘稠。我一般6孔板,一个孔加200ul RIPA,只要是提293T细胞, cell lysis就会像鼻涕一样(其他细胞,比如内皮细胞,就没有这种情况)。
有人说这是因为细胞里面的基因组被释放出来了,粘稠的就是DNA。所以我一般会使用超声破碎,30%强度10-15s。超声破碎之后cell lysis就会变正常了。这种方法做一般的western-blot没有问题(实践经验)。
然而问题是,当需要提取293T细胞蛋白做Co-IP的时候,cell lysis还是这样粘稠,但是由于实验需要看的就是蛋白质之间的相互作用,这个时候就无法使用超声破碎了。那么,遇到这种情况要怎么办呢?
还有一个问题就是,即使是做普通的WB,cell lysis特别粘稠是不是可以不用管它直接主单白?因为反正粘稠的东西是DNA,煮蛋白的时候一般都是95-100度,DNA也被破坏了。所以想问问大家遇到这种情况都怎么办?
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.2 万