总结一份细胞传代protocol

以293T为例：

1、原10cm板加入Tyrisin 2ml，左右摇晃铺满皿底，静置2min左右；

2、可在显微镜下观察细胞是否游离，加入2ml DMEM终止消化；

3、将板稍倾斜，1ml枪头吸取培液柔和吹打皿底，使细胞充分游离至液体；

4、将皿中细胞悬液转移至5ml无菌离心管中，1000rpm离心3min；

5、离心过程中，取新的10cm板，向其中加入10ml DMEM；

6、取出离心后的离心管，稍倾斜，吸引器接1ml枪头将上清吸除，注意勿碰到管底细胞；

7、加入2ml DMEM, 1ml枪头吹打混匀，此时可进一步做细胞计数；

8、1ml枪头从离心管中吸取500μl细胞悬液，均匀滴入新的10cm板中；

9、画8字水平晃动培养皿20次，停止时有减速过程，倒置显微镜下观察细胞是否铺板均匀；

10、将培养皿放入培养箱；

11、清理生物安全柜中物品，台面喷洒75%酒精，并擦拭干净，关闭前面板，开紫外消毒。