【求助】BamHI和XhoI双酶切问题
发布于 2010-01-13 · 浏览 7027 · IP 重庆重庆
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构建载体，反复转化5-6次了没有成功，请大家帮看看。
载体片段约5000bp 酶切回收后测浓度150-300ng/ul
插入片段约500bp 酶切回收后测浓度50-150ng/ul
双酶切BamHI和XhoI
酶切体系50UL或100UL都用过，酶切质粒用量为总体系的一半即25ul或50ul
酶切后电泳酶切效果很好，两条带很清晰，回收条带也很亮
苦于连接转化多次没有结果，基本不长斑。感受态效率应该没有问题，因为做其他亚克隆正常
请大家指点指点。
如果以下面的情况而言如何选择酶切体系？
载体片段约5000bp 酶切回收后测浓度200ng/ul为例
插入片段约500bp 酶切回收后测浓度60ng/ul为例
这种情况该选择何种体系连接？
载体片段约5000bp 酶切回收后测浓度150-300ng/ul
插入片段约500bp 酶切回收后测浓度50-150ng/ul
双酶切BamHI和XhoI
酶切体系50UL或100UL都用过，酶切质粒用量为总体系的一半即25ul或50ul
酶切后电泳酶切效果很好，两条带很清晰，回收条带也很亮
苦于连接转化多次没有结果，基本不长斑。感受态效率应该没有问题，因为做其他亚克隆正常
请大家指点指点。
如果以下面的情况而言如何选择酶切体系？
载体片段约5000bp 酶切回收后测浓度200ng/ul为例
插入片段约500bp 酶切回收后测浓度60ng/ul为例
这种情况该选择何种体系连接？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 7027
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