【求助】原核表达纯化:为什么片段可以表达,全长很难表达
我准备做一个蛋白全长的原核表达纯化,顺便做了一个蛋白N-段的片段。片段和全长都构建在pGEX6P-1载体中,pGEX6P-1载体中在插入片段的上游有GST融合蛋白的序列。表达菌种是Bl21 codon plus。N-端片段长210bp,全长有1200bp。发现片段很容易表达,37度和23度都有上清表达。但是全长37度和23度都没有。求助各位大侠,怎么改进?是换个克隆,还是换感受态菌种,还是重新换载体呢?求助各位大侠能给点建议,怎么改进?
我准备做一个蛋白全长的原核表达纯化,顺便做了一个蛋白N-段的片段。片段和全长都构建在pGEX6P-1载体中,pGEX6P-1载体中在插入片段的上游有GST融合蛋白的序列。表达菌种是Bl21 codon plus。N-端片段长210bp,全长有1200bp。发现片段很容易表达,37度和23度都有上清表达。但是全长37度和23度都没有。求助各位大侠,怎么改进?是换个克隆,还是换感受态菌种,还是重新换载体呢?求助各位大侠能给点建议,怎么改进?