纯化后的蛋白质怎样保存？

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在辛辛苦苦进行了表达和纯化目的蛋白后，我们不免会面临另一个问题：如何储存纯化后的蛋白呢？如果不加注意，就会有前功尽弃的可能。

首先，储存方法的选择取决于蛋白质的稳定性，以及后续实验使用蛋白质的时间和用途。储存时需要避免接近蛋白质稳定极限的储存条件（例如极端 pH 或者接近蛋白质等电点的 pH）。其次，避免添加会干扰后续实验的成分。

保存方法如下：

1. 短期保存（24 小时内）

大多数的蛋白质可以保存在 4°C。

2. 在 4°C 超过 24 小时 

需要考虑对蛋白样品灭菌过滤（使用 0.22 µm 过滤器），或者加入抑菌剂（例如 0.1% 叠氮化钠）以避免细菌生长。值得注意的是，并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。

3. 长期保存（一周以上）

需要将蛋白样品冻存。使用液氮或者干冰/乙醇混合物将其快速冷冻避免蛋白质变性。可以将样品分装至多个管子中，来避免反复冻融可能造成的活性降低或影响结构。

可以添加几种稳定剂，如甘油（5 - 50%（w / v）），血清白蛋白（10 mg / ml），还原剂（例如 1 mM DTT）和配体（其性质和浓度取决于靶蛋白的性质和浓度）。

4. 保存几个月 

可以将其保存在-20°C，并加入 50% 甘油避免冻住。

5. 保存几个月至几年 

此时应把样品在-70°C 或液氮中冷冻。在这种温度下，加甘油就没那么有必要了，但加 5 - 50% 的甘油可以帮助保持蛋白质的稳定性。

6. 其他储存方法：

4°C，在硫酸铵沉淀中保存。

冻干的形式保存：在 4°C 或更低温度下。要冻干保存的话，须将蛋白质溶在挥发性缓冲液（例如三甲胺/ HCl；pH 范围 6.8 - 8.8）中。而且需要注意，并非所有蛋白质在冻干过程中都是稳定的。

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