【求助】请教关于基因步移中的一些问题~
发布于 2008-05-29 · 浏览 967 · IP 未知未知
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各位好，最近实验中遇到了些问题，望大家帮忙分析一下。
我在一段长约1500bp的片段上设计了两组引物（共六条），向下游扩增时，第一次实验前两轮电泳看不到条带，第三轮有约500bp带，测序回来证实为非特异性扩增；第二次实验降低了一点退火温度（68to63），前两轮有1000多bp条带，第三轮却无条带，只是在加样孔附近有弥散的DNA。
PS:每次扩增我都是4条AP引物平行扩增；前一轮的产物取1微升作为后一轮的模板；
使用TAKARA的GENE WALKING KIT.
实在想不出什么原因了，下一步怎么办？
我在一段长约1500bp的片段上设计了两组引物（共六条），向下游扩增时，第一次实验前两轮电泳看不到条带，第三轮有约500bp带，测序回来证实为非特异性扩增；第二次实验降低了一点退火温度（68to63），前两轮有1000多bp条带，第三轮却无条带，只是在加样孔附近有弥散的DNA。
PS:每次扩增我都是4条AP引物平行扩增；前一轮的产物取1微升作为后一轮的模板；
使用TAKARA的GENE WALKING KIT.
实在想不出什么原因了，下一步怎么办？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 967
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