【求助】离子交换和分子筛难分分子量和等电点相差都大的2个蛋白
发布于 2006-11-30 · 浏览 2969 · IP 上海上海
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我有一个原核表达的融合蛋白A,用十因子酶切后形成2个蛋白B和C.
A分子量58KD,PI 6
B分子量46KD PI 5.6
C分子量12KD PI9.4
其中C是我想要的.
1:我先过分子筛G75,发现C蛋白完全排阻,电泳后该峰仍含少量A和B 2个蛋白.我试着提高离子强度,该NaCL 1M 1.5M 2M 该PH7.0 7.5 8.0效果一样.
2:改用SP FF 阳离子交换Tris 20mM PH7.0 上样, Tris 20mM NaCL 1.5M PH7.0洗脱,结果有少量C穿出,洗脱带少量B,
3:联用分子筛和离子交换结果同离子交换
我要非变性的蛋白做功能.
请教各位高手怎样改变纯化方案.
A分子量58KD,PI 6
B分子量46KD PI 5.6
C分子量12KD PI9.4
其中C是我想要的.
1:我先过分子筛G75,发现C蛋白完全排阻,电泳后该峰仍含少量A和B 2个蛋白.我试着提高离子强度,该NaCL 1M 1.5M 2M 该PH7.0 7.5 8.0效果一样.
2:改用SP FF 阳离子交换Tris 20mM PH7.0 上样, Tris 20mM NaCL 1.5M PH7.0洗脱,结果有少量C穿出,洗脱带少量B,
3:联用分子筛和离子交换结果同离子交换
我要非变性的蛋白做功能.
请教各位高手怎样改变纯化方案.
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2969
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