【求助】小蛋白表达不出来,郁闷!
我最近做一个小蛋白的表达,目的是做抗体,大概只有5KD 左右,用的是PET28a载体,选的是NdeI/xhoI 酶切位点,在xhoI 位点加了 stop codon,测序都是正确的,然后用转进BL21(DE3)宿主菌。但是做了几次都没看见有诱导。各位大侠,除了优化OD值,摸索IPTG浓度,诱导温度,是不是因为蛋白小对诱导也有影响啊?有个同学说,把小蛋白串连几段,然后再装进载体,这样就容易表达些,是不是这样呢?大家还有些什么建议?现在急死了。
我最近做一个小蛋白的表达,目的是做抗体,大概只有5KD 左右,用的是PET28a载体,选的是NdeI/xhoI 酶切位点,在xhoI 位点加了 stop codon,测序都是正确的,然后用转进BL21(DE3)宿主菌。但是做了几次都没看见有诱导。各位大侠,除了优化OD值,摸索IPTG浓度,诱导温度,是不是因为蛋白小对诱导也有影响啊?有个同学说,把小蛋白串连几段,然后再装进载体,这样就容易表达些,是不是这样呢?大家还有些什么建议?现在急死了。