【求助】IP遇到困难！请帮忙！

细胞用lysis buffer（含8M的尿素）裂解，再用RIPA稀释10倍，500ug提取物进行IP，用法码西亚的Protein G提IgG，western后，发现直接上lysate（50ug）的lane有目的条带，IP泳道只见很浓的IgG条带。连续作了几次了，增加了抗体的用量，还是不行！目的蛋白大小190KD左右。现在考虑是不是RIPA里面的detergent太多(1%)，用的是TRITON X100。
请高手给点建议，不胜感激！