孤带，难道是非特异性带,非常着急，请各位务必帮忙分析一下

我要扩的目标带为300bp, 但每次扩出来的带的位置总要稍微高于300位置少许，大约在320bp的位置，且为一条孤带，难道是非特异性带，若是非特异性，为何时孤带？况且退火温度为60度，时间为半分钟。

非常着急，请各位务必帮忙分析一下。