[求助] 关于 过氧化氢酶同工酶 染色的问题
1. 取1g植物叶片,加5 ml 0.1 mol/L pH 7.8的磷酸二氢钾缓冲液,研磨并静置3小时。
2. 取以上样品加入EP管,然后在4 摄氏度,10000rpm离心10min。
3. 取上清液,加入等体积的40%蔗糖,并加入0.025%的溴酚蓝,混合均匀。
4. 用PAGE(非变性PAGE),浓缩胶:4% pH6.7,分离胶:10% pH8.9,电压150-200V电泳3-4小时。
5. 用过氧化氢酶同工酶染色液进行染色。配方如下:
A液: 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸缓冲液 5ml,0.1 mol/L 硫代硫酸钠 3.5 ml, 3% 过氧化氢25 ml。
B液:0.09 mol/L KI 25 mL,蒸馏水25 ml。
先用A液浸泡 15分钟后,水洗,再用B液浸泡。
这是 胡能书 《同工酶技术》上面的配方,我也一直照着上面的方法再做,但是,一直都没有染出条带,连配方中所说的蓝色背景都没有染上!
PS:我在用A液浸泡的过程中,胶不断冒着气泡,用B液浸泡的时候也会冒气泡,而且还有声音。
但是,没有条带,也没有蓝色背景,而且胶的颜色非常透明。
请问,这是怎么回事?谢谢大家!