【求助】表达载体连接
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这些日子做表达载体的连接总是连不上,首先我用PCR产物直接过柱回收,BamHI和HindIII双酶切(都加了保护碱基),再过柱回收,表达载体pcDNA3.1(+)同样用小抽kit做的,同样双酶切,同样回收,最后两者在16度下连接18小时,转化top10,结果是一片空白,酶用的是宝生的,做了两次都不成功,各位大侠我错在什么地方了,正下***谢了!
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这些日子做表达载体的连接总是连不上,首先我用PCR产物直接过柱回收,BamHI和HindIII双酶切(都加了保护碱基),再过柱回收,表达载体pcDNA3.1(+)同样用小抽kit做的,同样双酶切,同样回收,最后两者在16度下连接18小时,转化top10,结果是一片空白,酶用的是宝生的,做了两次都不成功,各位大侠我错在什么地方了,正下***谢了!
