疑惑；求助：在分化过程中筛选压的选择问题

鄙人在做水稻转基因的研究中，在分化阶段遇到些疑惑，望各位高手指点迷津~~~~~：
在用农杆菌与水稻愈伤共培养转化之后，用HYP，CEF梯度浓度筛选三轮后，并在预分化中再筛选了一次，请问，用筛选了这么多次的幸存愈伤做分化需要再加HYP，CEF等抗生素吗？抗生素用的过多会导致转化成功的愈伤被杀死吗？没有转化成功的愈伤经过这么多次抗生素的筛选还可能存活吗？
谢谢了！