[求助] 关于贴壁细胞在支架材料上的裂解
我在本版检索了一下,发现贴壁细胞都是从培养瓶或培养皿刮下来裂解,或者裂解后刮下,但是我的细胞在支架的网孔内,无法刮下,请问裂解细胞后刮下细胞很重要吗?
也有用胰酶先消化下细胞再裂解的,但是我做的试验是用一种细胞因子刺激后观察信号传导通路蛋白的,如果中间加入胰酶可能同样会对信号传导通路产生影响,请问可以用胰酶消化吗?
还有假如我直接在支架材料上(1cm*0.5cm*0.5cm大小)裂解细胞的话,加入的裂解液的量如何掌握,加入的少可能液体收集不到(因为支架很很多细小的网孔),加入的多可能蛋白浓度很底。
我考虑一种方法不知道大家是否认为可以,就是多加一些裂解液直接在支架材料上裂解细胞,收集裂解液,不收集细胞碎片(也就是无贴壁细胞刮下步骤),这样收集的蛋白浓度可能很低,冷冻干燥浓缩蛋白,我怕冷冻干燥会不会影响蛋白活性,是不是应该先煮沸进行蛋白变形,然后在冷冻干燥,高手们讨论一下这种方法行不行,有没有更好的,超声粉碎合适吗,多谢了啊
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1413