为何蛋白改造后出现纯化困难的问题？

我对一个157 kDa的NRPS蛋白进行点突变、结构域替换的改造实验，以期改变蛋白活性。该蛋白原本比较容易纯化，但我的所有改造蛋白都出现不挂柱，纯化困难的情况。

起初我猜测是His标签被遮挡了，因此尝试替换SUMO、CBD标签，或者更换蛋白表达宿主依然不挂柱，但依然不挂柱，纯化不到蛋白。

求教大佬们有没有遇到过类似问题，以及如何解决？