【求助】 使用双酶切定向克隆总是？连接不上
这个帖子发布于 19 年零 208 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我使用的目的片段和载体分别用BamH1和Xbal1切，酶切产物电泳后胶回收与纯化呈线性片断，目的片段和载体连接摩尔比例4：1，4度过夜，第一次连接后空板但阳性对照没问题，第二次连接后只长了一个菌落，菌体PCR证明没有插入片断，第三次连接后长了约200－300个菌落，接连挑了十几个菌体PCR均没有插入片断，已经耗了一个月的时间，请问：1、酶切时间均为两小时，且电泳后为线性条带，问题会出在酶切上吗？2、双酶切定向克隆为什么会出现那么多载体的自连和假阳性呢（连接酶没问题，同室的人就连上了）
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