胚胎移植

胚胎移植

一、概念及意义：
胚胎移植是将两种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成新的个体，又称借腹怀胎。提供胚胎的个体称为供体，接受配体的个体称为受体。其为提高良种母畜的繁殖力提供了新的技术水平。
二、基本原则：
1．胚胎移植前后所处环境的同一性：供、受体在分类学上的相同属性，即二者属于同一物种；动物生理上的一致，即供、受体在发情时间上的同期性，在实践中供受体发情的同步差要求在24小时以内；动物解剖部位的一致性，即移植前后胚胎位置的相似性。
2．供、受体的状况：具有遗传优势，供体的生产性能要高于受体，经济价值要大于受体
3．技术程序：超数排卵、供受体同期发情处理，供体的发情鉴定与配种、胚胎的采集、检查、鉴定、保存、胚胎的移植。
① 供、受体的同期发情
② 供体的超数排卵 a用FSH超排 b用PMSG超排
③ 供体的发情鉴定和配种
④ 胚胎的采集：采胚就是借助工具利用冲胚液将胚胎从生殖道中冲出并收集在器皿中。方法：手术法和非手术法。
a手术法：剖腹，根据间隔时间确定部位，注入冲卵液回收受精卵。
b由于手术法采胚在生产实践中受到限制，目前在牛等大家畜中都用采胚管进行非手术法采胚。一般在配种后7天进行。
非手术法
保定牛
麻醉
消毒
检查黄体数目
伸入采胚管
充气和冲胚
⑤ 胚胎的检查与鉴定
静置法：
在20-25℃的无菌操作室里，把盛冲胚液的容器静置20-30分钟，因胚胎比重大，会下沉到容器底部，然后将上面的液体弃去，将下面的几十毫升的冲胚液倒入平皿中，在；立体显微镜下检查。
鉴定：形态学
⑥ 胚胎的保存：是在体外条件下将胚胎贮存起来而不失去其活力，通常有三种方法
a常温保存胚胎：胚胎在常温15-25℃保存，在此温度下只能存活10-20小时，因而只能做短期保存。
b低温保存：是指在0-10℃较低温度下保存胚胎的方法，培养液为PBS，牛的温度为0-6℃。
c冷冻保存：见6）
⑦ 胚胎移植法:
经检查后完整的胚胎即可移植到受体子宫内。移植必须在同一部位或相似部位。整个过程必须迅速准确，保持无菌操作。
a手术法：腹部手术法：剖腹，拉出子宫角，将胚胎移植相应发育部位。
b非手术法：
子宫颈移入法：以导管通过子宫颈移入子宫角顶端。
子宫颈迂回法：通过阴道穿刺，借助插入直肠的手，用月针形导管将胚胎移入子宫角
1．冲卵液（PBS）的配制
（1）改进的PBS配方：
氯化钠 136.87毫摩尔 8.00克/升
氯化钾 2.68毫摩尔 0.20克/升
氯化钙 0.90豪摩尔 0.10克/升
磷酸二氢钾 1.47毫摩尔 0.20克/升
氯化镁 0.49毫摩尔 0.10克/升
磷酸氢二钠 8.09毫摩尔 1.15克/升
丙酮酸钠 0.33毫摩尔 0.036克/升
葡萄糖 5.56毫摩尔 1.00克/升
牛血清白蛋白 3.00克/升
（或犊牛血清） 10毫升/升
青霉素 100单位/毫升
链霉素 100单位/毫升
双蒸水加至 1000毫升
（2）PBS液的配制：为了便于保存，可用双蒸水分别配制成A液和B液，以便高压灭菌，也可配制成浓缩10倍的原液。
A液 100毫升 500毫升 1000毫升
氯化钠 8.0克 40.0克 2.0克
氯化钾 0.2克 1.0克 2.0克
氯化钙 100毫克 500毫克 1.0克
氯化镁 100毫克 500毫克 1.0克
B液
磷酸氢二钠 2.16克 10.8克 21.6克
（ 或无水） 1.144克 5.72克 11.44克
磷酸二氢钾 200毫克 1.0克 2.0克
配好的A、B原液和双蒸水分别高压灭菌，低温保存待用。
（3）冲卵液的配制：使用浓缩A、B原液各取100毫升，缓慢加入灭菌双蒸水800毫升充分混合。取其中20毫升，加入丙酮酸钠36毫克、葡萄糖1.0克，牛血清白蛋白3.0克（或羊血清10毫升）和抗生素，充分混合后用0.22微米滤器过滤灭菌，倒入大瓶混合均匀待用。冲卵液PH为7.2—7.4，渗透压为270—300毫摩尔。A、B液混合后，如长时间置于高温（﹥40℃）下，会形成沉淀，影响使用，应注意避光。
（4）保存液的配制：2毫升供体