动物实验常用技术标准操作规程（七）&动物给药

 在动物实验过程中,为了观察药物对机体功能、代谢及形态引起的变化,常常需要将药物给予于实验动物体内。给药的途径和方法是多种多样的 , 应根据不同的实验目的、动物种类 药物剂型来决定动物的给药途径与方法。

  动物的给药方法主要分为投入法和注射法两种,根据给药途径又分为很多具体的类型投入法可分为经鼻腔投入、经胃腔内投入、经肠管内投入、经气管内投入和经口腔投入等;四法分为皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜内注射、脑内注射、·胸腔内注射、静脉注射、关节内注射和心内注射等。

  根据实验需要,我们可以采用不同的实验动物给药途径,但要使实验药物准确进入实验动物,我们要注意不同途径的给药容量(见表4-5-5、表4-5-6）。

  以下将各种动物的主要给药途径和方法一一介绍。

( 一 ) 经口腔投入给药

1. 液体药物的投入

(1) 小鼠、大鼠、沙鼠 通常使用不锈钢、头端球形的灌胃针操作。

l) 根据实验要求配制受试药液,按相应操作规程将动物称重,计算出给药容积。

2) 大鼠采用2～5ml注射器、小鼠用1ml注射器,分别装上大鼠、小鼠灌胃针头,抽取受试药,置实验台上待用。

3) 用右手抓住鼠尾将鼠提起,放在鼠笼上或粗糙面上。将鼠尾轻轻向后拉,待鼠向前爬行时,用左手拇指和食指抓住鼠的两耳和头部皮肤,其他三指抓住背部皮肤,将鼠抓持在手掌内。

4) 使鼠腹部朝上,颈部拉直,头部向后略倾斜,测量灌胃针头到胃内的位置(成年小鼠从口腔应开始的深度大约 3cm,大鼠、沙鼠从口腔开始的深度大约5cm)。

5) 右手取已抽好受试药的注射器,把灌胃针的前端放进动物口腔,顺着上腭部插入咽部;醒目针头的前端通过咽喉部后有抵触感,轻轻转动灌胃针头的前端,沿着动物的纵轴平行插入;进入食道后没有抵抗感,然后把灌胃针头插入到动物胃部所需要到达的位置。

6) 右手拇指推动注射器,将药液徐徐推入胃内,注射完毕后轻轻取出灌胃针头。

  其技术要点是:动物要固定好;头部颈部保持平展;进针方向正确;一定要沿着口角进针,并沿咽后壁顺着食管方向插入胃内;决不可进针后,在动物剧烈挣扎时强行灌胃。

(2) 豚鼠所使用的灌胃针及操作技术要点向上。

1) 根据实验要求配好受试药的浓度,将动物称重,计算出给药体积。

2) 用2～5ml注射器抽取受试药,装上大鼠灌胃针头。

3) 抓稳豚鼠躯体,左手拇指和食指抓住豚鼠头部两侧,其他三指抓住身体的下半部，使豚鼠固定在手中。

4) 使腹部朝上,颈部拉直,头部向上有一个倾斜度,测量灌胃针头到胃内的位置(豚鼠的口腔开始的深度大约 5cm)。

5) 右手持已抽好受试药的注射器,针头沿鼠左侧嘴角通过食道进入胃内。

6) 右手拇指推动注射器,将药液推入胃内。

(3) 家兔通常使用软的8#橡皮导尿管插管灌胃。

  插管最常见的并发症是食管损伤和把受试物误投入气管,故最好能在动物做吞咽动作将胃管经咽部送入食道。用压舌板或木制开口器可防止动物在导人胃管时咀嚼,有时也采鼻饲。操作时,事先将待插的导尿管泡在水或生理盐水中,这样容易插入且不容易损伤食道。

1) 根据实验要求配好药液,按相应的标准操作规程抓取家兔并称重,计算出给药体积；另准备150ml烧杯一个, 内装清水约l00ml 备用。

2) 操作者取坐式将家兔的腹部以下躯体夹于两大腿之间,左手握住家兔双耳,右手抓双前肢。

3) 另一人的拇指和中指在家兔的两颊部从下顿处紧紧挤压,从两口角按向口腔内;用手将木制开口器从一侧口角插入口腔,使家兔咬住开口器,家兔舌在开口器下方稍出来一些，使开口器接近口角,由外向内翻转开口器使之压住舌面,将开口器的布条绕过头颅并捆在耳根部,固定开口器。

4) 操作者取导尿管一根,将其管前端以清水浸湿,经开口器中部小孔将其缓缓向食道插入,自家兔口腔开始深度大约为15～20cm左右( 随家兔大小可适当调整)。

5) 将导尿管的外端浸入烧杯的水中,等候片刻,若有气泡自管中冒出,则表明在气管应拔出再插;若无气泡自管中冒出,表明插入胃中,可进行给药操作。

6) 取准备好药物的注射器,将注射器接在导尿管上将药液缓缓推入,此时家兔应较安可能还可见吞咽动作。

7) 药物推注完毕 , 再用注射器吸取少量 (3～5ml) 空气或生理盐水推人 , 使导尿管中有药液残留。

8) 随后捏闭导尿管外口,较快抽出导尿管后取出开口器,将家兔归笼并观察。

(4) 犬通常使用软的12#十二指肠管或橡皮导尿管,亦可用内径0.3cm的软胶灌胃。

  操作时,准备150ml烧杯一杯,内装清水约 l00ml,事先将待插的导尿管泡在水或生水中,这样容易插入且不容易损伤食道。

1) 按相应的标准操作规程抓取犬,或将其固定于采血台上,或助手取坐位,将犬背朝自己,一只手固定头颈,另一只手固定双前肢,并以双大腿夹住犬的下腹部以下部位(遇凶狠的犬应先用纱布将犬嘴绑住)。

4) 用右手拇指和食指将灌胃管插入此空隙,并顺食管方向不断送入。

5) 如送入很顺利 , 当胃管插入深度大约20cm时,不要再向里插,因已进入食管下段胃内,先将胃管外端口插入盛水的烧杯中,若无气泡自管中冒出,则认为导尿管己插入胃内,即可将 粮经胃管缓慢灌入。

6) 药液注完后,抽出注射器,吸进约3~5ml空气或生理盐水,再将其注入胃管内,注毕迅速抽出胃管。

7) 如遇胃管送入不顺或犬剧烈挣扎时,不要再向里插,可拉出重插。

  也可以使用开口器(木制长方形,长10～15cm,厚2～3cm) 固定,操作时将其放入动物的上下门齿之间,用绳将其固定于犬嘴。将带有弹性的橡皮导管,经开口器的小圆孔插入,沿咽 蹭插入食道,其他操作同上。

(5) 猴通常使用软的橡皮管或导尿管。

  操作时,准备150ml 烧杯一个,内装清水约l00ml,事先将待插的橡皮管泡在水或生理盐水中,这样容易插入且不容易损伤食道。

  按猴的抓取与SOP规定控制住猴,先将猴嘴掰开,把外径5～7mm的橡皮管插入食道,自动物口腔开始深度大约为15cm。

  经鼻腔给药时,托起猴子下颁使其嘴紧闭,从鼻孔处将外径1.5mm的塑料管(涂上石蜡油)慢慢插入食道内,特别注意不要插入气管。

2. 固体药物的投入

  使用固定药物投入途径通常适用于体型较大的动物,大小鼠类通常不采用。

(1) 豚鼠把豚鼠放在实验台上,用左手从背部向头部握紧并固定动物,以拇指和食指压迫左右口角使其口张开。实验者把药物放在舌根处,使豚鼠迅速闭口而自动吞下。

(2) 犬片剂、丸剂、胶囊给药时常徒手经口给药。

  给药时,掰开动物的上下领部,用慑子将固体药物送入犬的舌根部,合起上下领,犬可以咽下药物。投药前以水湿润口腔内部,使之容易咽下。

(3) 猴一般在非麻醉情况下给予片剂或胶囊,给药方法类似于犬。此时,需要特别注意,防止猴伤人。

  操作时,事先由助手将猴子固定好,实验者把左手掌贴在猴的头顶部到脑后部的部位,用持指及食指压迫猴的左右面颊,使其上下腾的咬合处松开,然后用右手拿长镶把固体药物送入猴的舌根部。迅速抽出镊子,把猴的上下腾向上一推,使其闭上嘴,让猴自己咽下即可。

（二） 经静脉给药

  静脉给药的方法较多,不同种类的动物及动物的不同部位,其静脉给药各有其特点。

1. 大鼠、小鼠尾静脉注射

  小鼠的尾静脉血管在背、腹侧及左右两侧均有分布,每侧均由数对伴行的动、静脉组成的血管丛,在这些血管中有四根十分明显:在尾巴背、腹侧面上下各有一根动脉,尾两侧各有一根静脉,容易固定。

(1)按相应的标准操作规程将大(小)鼠抓起放进专用鼠筒内,固定鼠身,使鼠尾外露。 

(2) 用75%酒精棉球擦拭鼠尾,或在45～50℃热水中浸泡半分钟,使其表皮角质软化,血管扩张,尾静脉显得更清楚,然后将尾部向左或向右拧90°角,使一侧尾静脉向上,以左手食指 和中指捏住鼠尾上下,使静脉充盈,用无名指从下面托起尾巴,以大拇指和小指夹住尾巴的末梢。

(3) 右手持带有4～5#针头的1ml注射器或一次性1ml注射器抽取药液。

(4) 用左手拉住尾尖,选择一条扩张明显的尾静脉,在尾下1/3处(约距离尾尖2～3mm)以45度角进针,将针头刺入血管后放平针头并固定,按实验要求推入药液,先缓慢注射少量液体液,如无阻力,表示针头已经进入静脉,可继续注射,如推注时有阻力,且局部变白,表明针头未刺入血管,应退出再重新操作。一般推进速度为0.05～0.10ml/s,一次注射量为0.05～0.25ml/10mg体重。注射时注意药液排气完全,不能有气泡进入,否则会引起动物死亡。

(5) 注射完毕,以左手拇、食指取消毒干棉球轻轻地按住注射部位拔出针头,把尾巴向注射器侧弯曲以止血,右手放下注射器。

(6) 如需要反复注射,应尽可能从尾巴末端开始,向尾巴根部方向移动注射。

  大鼠尾部皮肤常呈鳞片状角质化,因而将大鼠固定露出尾巴后,需要先将酒精棉球强擦使血管扩张,并可使表面角质软化。然后将尾部向左或向右拧 90度角,此时尾巴表面的静脉处于怒张状态。后面步骤同小鼠。一般推进速度为0.05～0.10ml/s,一次注射量为0.5～1.0ml/100g 体重。

2. 大鼠的阴茎静脉注射

  这是大鼠静脉输液给药的一种常用方法。

  将雄性大鼠麻醉后仰卧或侧卧,翻开包皮,拉出阴茎,背侧阴茎静脉非常粗大、明显,沿皮下直接刺入即可。

3. 大鼠的舌下静脉注射

  操作时,先麻醉好动物,再拉出舌头,找到大鼠的舌下静脉,直接注入药液即可。

4. 豚鼠的静脉注射

  豚鼠的静脉给药包括耳缘静脉和后肢距静脉注射两种。

(1) 将豚鼠装入特制的盒内或由一人抓住按在桌上固定,露出耳部,然后由助手用拇指和食指夹住其耳翼并压住豚鼠的头部,右手按住豚鼠腰部。

(2) 操作者拔去注射部位的毛,用75%酒精棉球擦拭耳部边缘静脉,用于拍打或用手指轻弹或揉搓耳部,使耳部静脉扩张、充血,然后用左手食指和中指夹住静脉近心端,拇指和食指夹住耳边缘部分,以左手无名指、小指放在耳下作垫,待静脉充分暴露。

(3) 用右手持0.5～1ml注射器抽取药液,装上4#针头,注射时尽量从静脉未端顺血管平行方向刺入1cm。

(4) 刺入静脉后,将注射器回抽,见有回血后,放松对耳根处血管的压迫,固定针头缓慢推入药液,如针头在血管内,则药液进入无阻,否则隆起发白出现皮丘,须拔出重新再刺,每只1次注射量不超过2ml。

(5) 注射完毕,抽出针头,用一干棉球压住注射部位,使血液和药液不致流出。

豚鼠的后肢跖静脉给药时,操作者从后膝关节抓住动物肢体,压迫静脉,将腿呈伸展状态。剪去注射部位的毛, 酒精棉球擦拭消毒后,可见粗大的后肢静脉,用6#或7#针头以向心的 向刺入血管注射。

5. 家兔的耳缘静脉注射

(1) 由助于按相应的标准操作规程将实验兔放入兔盒内固定好,操作者拔掉耳壳外缘的被毛。 

(2) 用75%酒精棉球涂擦耳缘静脉,用左手食指和中指夹住静脉近心端,拇指绷紧耳边缘静脉远端,无名指及小指垫在下面,再用右手轻弹或揉搓兔耳,使静脉充盈充分暴露。

(3) 用右手持2～20ml一次性注射器(视注射体积定),6# 针头,抽取药液,排净空气后备用。

(4) 尽量从血管远心端将针头刺入皮下,并推进少许,而后刺入血管,如见针头在血管内,推动注射器时元阻力、元皮肤隆起发白,EP以左手将针头和兔耳固定,按要求缓慢推入药液;如果注射有阻力,局部发生肿胀,表明针头不在血管内,立即拔出重新刺入。

(5) 注射完毕,抽出针头,用消毒干棉球按压注射部位针眼并持续数分钟,使血液和药液不致流出,待止血后将动物归笼或作其他观察。

6. 犬的静脉注射

  犬的静脉给药常包括前肢前臂内侧皮下静脉、后肢小隐静脉及耳缘静脉注射给药三种途径。

(1) 按相应的标准操作规程抓取犬,由助于将犬固定在专用固定架上处于侧卧(前后肢静脉注射)或站立(耳缘静脉注射)状态。

(2) 用电动推剪剃净给药部位的毛,显露出血管,分别用医用腆町棉球和75%酒精棉球消毒皮肤,然后用消毒干棉球擦干。

(3) 在静脉的近心端用止血带扎紧,使血管充盈。

(4) 静脉滴注:用一次性输液器从静脉的远心端刺入,先刺进血管旁的皮下,尔后与血管平行方向刺入静脉内,抽动注射器,如见有回血则松开止血带 , 放松对静脉的近心端的压迫 , 并将针头顺血管再刺进少许 , 固定贴或橡皮膏固定好注射器针头 , 打开输液器开关 , 然后根据实 验要求调节输液速度。待药液输完 , 拔掉针头 , 用干棉球压迫针眼处止血 , 观察5min若无异常 将犬放回笼中。

(5) 静脉注射 : 用已吸好药液的 10～50ml 一次性注射器从静脉的远心端刺入 , 见有回血时松开止血带 , 注射者按试验要求一手固定针头、一手将药液缓慢推入。

(6) 若注射失败或需重复注射 , 可按上述操作在前次针眼略近心端刺入。

此注射法的关键是要很好地固定静脉 , 因为犬的皮肤非常薄 , 此处静脉只隔一层皮肤 , 不仅浅表 , 而且容易滑动 , 注射时二定要绷紧皮肤使血管相对固定 , 针头刺入不可深 , 方向一定与 血管平行。犬前肢内侧皮下静脉比后肢小隐静脉还粗一些 , 而且比较容易固定 , 因此 , 一般作 协注射或采血时常使用此静脉 ; 前肢内侧正中静脉位于前肢内侧面皮下正中位置 , 向上延伸至肱静脉 , 此血管位置较深 , 注射时有时需要切开皮肤。

7. 猴的静脉注射

  猴的静脉注射常选用前肢挠静脉或后肢隐静脉给药 , 方法与犬相同。