划痕实验protocol

划痕实验/Scratch 

1将细胞接种于24（3×10^5cells/孔）或96孔板中，用完全培养基培养。

2在70%融合度时（细胞密度约为70%），使用10微升枪头（小枪头）尖端刮细胞，并用PBS清洗细胞3遍，直至划痕清晰可见，划痕上没有残留的细胞。

3加入药物，孵育24h（时间根据自己的药物来定）。每组加入药物体积一致，药物体积不够的用1×PBS补齐。用无血清培养基培养，即DMEM basic或者其他培养基basic。

以无血清培养细胞作为阴性对照(Ctrl)。在0和24小时（期间每6h拍一次照）用显微镜拍摄图像。用ImageJ软件进行分析：作图以及迁移率。

实验前准备细胞铺板：铺板之前确定培养皿/瓶中的细胞状态，保证细胞状态良好。不同细胞铺板密度不一样。根据不同的细胞的生长特性，96 孔铺板一般在每孔 2 万～4 万个细胞。注：正式实验之前先摸索铺板密度。