蛋白泛素化检测条带

各位战友，最近做泛素化实验遇到问题，请各位指点，

实验目的：观察M蛋白突变前后对N蛋白泛素化水平的影响

实验过程：构建M基因野生型过表达载体（Flag-M-wt）、突变型过表达载体（Flag-M-mut）及N基因过表达载体（Myc-N），购买的泛素化质粒HA-Ub，分三组

A组：Flag空载体、Myc-N、HA-Ub同时转染HEK293T

B组：Flag-M-wt、Myc-N、HA-Ub同时转染HEK293T

C组：Flag-M-mut、Myc-N、HA-Ub同时转染HEK293T

转染后6h换液，继续培养24h，时间到之前加入MG132（终浓度10uM）处理8h，然后收集蛋白，以Myc抗体（鼠源）进行IP，HA抗体（兔源）进行western-blot检测，二抗为山羊抗兔荧光抗体，以下是泛素化WB结果，有两个问题请教各位

1.为什么泛素化条带不是抹带，而是集中在55~70这一部分？

2.Myc-N蛋白分子量大概在55稍低一点，正常情况下泛素化N的抹带是不是应该在55以上的位置，55以下不应有条带？