肠道菌群清理后用什么方法检测清理效果呢？若 qPCR 则用什么作为内参呢？
Q：用abx抗生素混合物做了一个老鼠短期清理，想看一下清理和不清理的菌群差异，打算做一个琼脂平板培养＋qPCR进行一个半定量的看两组肠道菌群总量的差异，结果死活找不到扩增总肠道菌群qPCR用什么内参？因为扩增就是用的细菌通用引物？扩增全长的基本所有肠道菌都能扩增到，然后再拿什么当内参呢
A1：对于测量肠道菌群总量的差异，确实常见的方法是使用通用引物进行扩增。在这种情况下，选择合适的内参是至关重要的，以确保准确的相对定量分析。以下是一些可能的选择作为内参的方法：
1. 16S rRNA基因：16S rRNA是广泛用于细菌分类和鉴定的标志性基因。您可以选择特定区域的16S rRNA基因引物作为扩增的目标，并使用其扩增产物作为内参。通常，选择16S rRNA的高保守性区域作为内参，如V3-V4区域。
2. 基因组DNA含量：您可以考虑测量样品中细菌基因组DNA的含量作为内参。这可以通过比较特定基因（如16S rRNA基因）的扩增产物与全基因组DNA的扩增产物的相对浓度来实现。
3. 稳定表达基因：您可以选择稳定表达的基因作为内参。这些基因的表达量不会受到菌群差异的显著影响。常见的选择包括16S rRNA基因中的某些高保守区域或其他广泛表达的基因。
需要注意的是，选择适当的内参需要根据您的具体实验设计和样品特点来决定。在进行相对定量分析时，内参的选择对于准确的比较非常重要。
Q：本人提取了鼠的胰腺干细胞，但只有部分贴壁，有很多小圆细胞，就是没有伸展开。这个是怎么回事呢？
A1：有以下几个可能的原因：
1. 细胞类型：胰腺组织是由多种细胞类型组成的，包括内分泌细胞和外分泌细胞等。在提取的细胞混合物中，某些细胞类型可能更容易贴壁和伸展开，而其他细胞类型可能更难以贴壁并呈现小圆形状。
2. 细胞状态：提取的细胞可能处于不同的状态，有些细胞可能处于休眠状态，而不活跃或进入休眠状态的细胞可能更难以贴壁和伸展开。
3. 细胞密度：细胞密度的影响也可能导致细胞贴壁的差异。如果细胞密度过高，细胞之间可能无法充分接触培养表面，导致一些细胞无法贴壁。
A2：细胞是不是密度太低了，适当增加密度会提高贴壁率
Q：小鼠摘眼球取血可能采血不规范血清出现淡淡粉色 溶血了还能做elisa 吗？
A1：可以做，尽可能选取无溶血红细胞的样本部分进行实验
A2：可以做，但是要把破裂的红细胞去除掉之后再做elisa
A3：在ELISA检测中，若样本溶血轻微（浅红色），仍可做ELISA检测，建议适当增加洗板次数，减少背景过高影响；若溶血严重（深红色），建议重新取样。
样本溶血可能会引起ELISA检测OD值升高、结果假阳性。原因可能是样本中游离的血红蛋白非特异性吸附在酶标板上，血红蛋白中的亚铁血红素具有类似过氧化物酶的活性，其作用类似于辣根过氧化物酶，进而催化底物的反应以增加样品的OD值并引起假阳性。
Q：大蒜素不溶于生理盐水，大蒜素胶囊也不溶，不知道文献里大蒜素灌胃是如何灌的
A1：可以用乙醇溶解大蒜素配置成大蒜素溶液使用
A2：大蒜素（Allicin）是一种疏水性物质，因此它并不容易在极性溶剂如水或生理盐水中溶解。然而，大蒜素在非极性或半极性溶剂中（如酒精，二甲苏等）能较好的溶解。
对于动物实验中的灌胃操作，可以考虑以下几种方法：
1. 使用溶剂：例如用少量的酒精或DMSO等非极性溶剂将大蒜素溶解，然后将其稀释到适当浓度。请注意，这种方法需要注意溶剂的使用量，以避免对动物产生潜在的毒性影响。
2. 使用悬浮液：大蒜素可以在某些液体中制成悬浮液，即使它们不能真正溶解。这样做的话，需要在灌胃前充分搅拌以保证大蒜素的分散。
3. 使用乳化剂：使用适当的乳化剂，如Tween-80，可以将大蒜素制成乳状液，这可以改善其在水性环境中的溶解性。
在灌胃实验中，选择哪种方法需要根据你的实验设计和要求来决定。并且在操作过程中，要注意充分搅拌和均匀分配大蒜素，以确保每个动物接受到的剂量一致。
A3：可以考虑用脂肪乳作溶剂。然后给小鼠灌胃
Q：网上没有搜到剥离小鼠视神经的教程，有没有大神指点一下视神经的位置，剥离时的注意事项等呀
A1：充分暴露小鼠眼球，外眦部角巩膜缘下方约1 mm处剪开结膜，沿后极部方向，紧贴眼球撕开筋膜，松解静脉窦后充分暴露小鼠视神经后进行剥离。
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最后编辑于 2023-05-25 · 浏览 979
