免疫组化｜分享 IHC 封闭、抗体、结果分析的一些经验

抗体的孵育条件怎么定、免疫组化结果如何分析....在做免疫组化相关实验的过程中总会遇到很多问题，今天这个帖子就来浅谈一下免疫组化实验经验～也希望各位大神在评论区分享自己的经验～

一、封闭血清的选择原则是什么？

1.膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性。

2.封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。

3.也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。

二、抗体孵育条件的比较？

1.一抗孵育温度有几种：4ºC、室温、37ºC，其中 4ºC 效果最佳；

孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般 37ºC 1-2 h，而 4ºC 过夜和从冰箱拿出后 37ºC 复温 45 min。

2.二抗一般室温或 37ºC 30 min - 1 h，具体时间需要摸索。

三、免疫组化结果如何分析？

1.阳性着色细胞计数法。在40 *光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3-6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。

2.灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用 image j 进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。

3.评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0-3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1-4分为 0-25%、26-50%、51-75%、76-100%），最终可以分数相加，再进行比较。

以上内容也参考了丁香实验小程序里面的经验，更多相关问题可以点击进入👉丁香实验【免疫组化】专题学习～视频课也给大家免费安排上～点击立刻学习👉石蜡切片制备及其免疫组化染色方法介绍～

大家还有什么免疫组化的实验经验可以分享吗～