有奖直播 | 多次跨膜蛋白一体化研究方案分享

2022 年 6 月 2 日，清华大学团队在 Nature Cell Biology 在线发表文章^[1]，报道了四次跨膜蛋白 Tetraspanin 4（Tspan4）可以介导膜上大伤口的修复。研究者发现在细胞膜受到激光、去污剂、细胞焦亡和自然杀伤细胞引起的损伤后，Tspan4 会迅速的在损伤处富集，在膜上形成名为 TEM（Tetraspanin enriched microdomain）的功能性结构单元，之后进一步组装形成微米级宏结构域，限制膜损伤的扩张之后对膜损伤进行修复，以此维持细胞在膜损伤后的正常生理功能。

另外，异常表达的膜蛋白也常被用做药物靶点，然而在膜蛋白研究中，最难的莫过于膜蛋白的表达和纯化，如

● 膜蛋白大多难溶于水，在制备过程中需要脂质或去垢剂包裹

● 在外源表达过程中容易损伤细胞，造成表达量低

● 在纯化时由于脂类存在，蛋白会有损失，回收率低

● 蛋白与膜分离后，构象难维持易聚集失活

……

如果你也在膜蛋白制备中苦苦挣扎没有出路，一定不要错过这场线上直播，5 月 11 日 14:00~15：00 丁香园将联合义翘为大家带来「多次跨膜蛋白的制备策略及案例分享」主题直播，不仅详细讲解膜蛋白研究进展与技术重难点，还会从实际案例中分享膜蛋白开发研究策略，帮助你清扫膜蛋白研究中的障碍！直播期间还有 2 轮互动抽奖，精美礼品数量有限先到先得！

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那么直播开始前，我们先来对膜蛋白纯化可能遇到的问题如何解决一睹为快吧～

膜蛋白不表达或者表达量低

可以选择对目的片段重新构建，进行密码子优化或改变表达宿主，也可以添加促溶标签或辅助蛋白。

蛋白构象不稳定且易聚集

添加辅助蛋白来确保构象正确，对某些可能引起聚集结构域进行截短或突变，调整蛋白缓冲液，添加还原剂或置换不同的去垢剂。

去垢剂千千万不会选

去垢剂大概分为非离子型、离子型和兼性离子型，非离子型以 Triton X-100 和 DDM 为代表，一般比较温和，不易导致蛋白质变性；离子型以 SDS 为代表，对于膜蛋白溶解非常有效；兼性离子型结合了离子型和非离子型去垢剂的优点，以 CHAPS 为代表，通常用于膜蛋白结晶。

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