qpcr 的 3 个复孔，其中一个 cq 值>0.5 但是<1 的孔可以纳入计算吗？
Q：qpcr 的 3 个复孔，其中一个 cq 值和另外两个相比 >0.5 但是 <1 的孔可以纳入计算吗。
A1：Cq 值的差距决定了是否可以纳入计算的标准。通常，差距小于 0.5 表示检测效率较高，可以纳入计算；差距大于 0.5 则说明检测效率较低，不可以纳入计算。对于 Cq 值差距为＞0.5 但是 <1 的孔，具体是否可以纳入计算需要根据实验具体情况判断。如果不确定是否纳入计算，可以考虑重新检测或使用其他方法来确定 Cq 值的正确性。
A2：最好把这个孔重新做一下对比差异再纳入
Q：请教 QPCR 上样顺序？
A1：我的方法：每孔先加 2ul cDNA，让后离心将其离到管底。然后再每孔加 8ul sybr ，引物，水的混合物（ 事先配好的混合物）。最后贴膜，离心，上机。这样的问题是，如果孔很多的话，最早加的 cDNA 感觉有蒸发，体积变小了。
A2：中途不需要离心的，全部加完贴膜之后再离心就行了。
A3：可以把 cdna 的添加顺序挪到后面，就可以尽量减少蒸发
A4：应该先加预混的探针，因为你加的探针量更大，冰上加样。
Q：要克的是外显子，利用 primer5 设计出的引物，再到 NCBI 上 blast。但是，blast结果没有目的基因，而且特异性也不好。想请教一下前辈，这种情况应该怎么办呀
A1：重新设计引物，把外显子的部分也包含进去。
A2：如果 BLAST 结果没有找到目标基因，可能是引物设计有问题，例如长度不够，特异性不足，或者目标基因的数据库没有完整的信息。对于这种情况，可以试着重新设计引物，或者使用更多的数据库搜索。同时，可以检查设备和实验方法是否正确，确保所用的样本符合要求。
A3：可以先试一下，如果你要克隆全长，primer5 设计出来的可以用，你 blast 可能是哪个参数没有设计好，才会 blast 不出来
Q：想问一下一个分子在有的不同癌种有的促癌有的抑癌怎么理解呢？在同一癌种不同细胞系也是有的表达增高有的减低，怎么理解呢？
A1：分子的调节可能是促进可能是抑制，主要还是看通路的反应方向
A2：因为有很多基因存在完全相反的趋势。表现出双重效应，当出现促癌和抑癌双重机制时，具体到每个个体，就取决于这两种效应强弱竞争的结果。哪种效应占上风就表现为哪种效应，但在有些癌种中，则表现出双重效应。
A3：一个分子在不同癌种中可以有促癌或抑癌作用是因为癌症是一种复杂的疾病，涉及多个生物学过程和多种细胞和分子。同一分子在不同癌种中的作用可能不同，因为它在不同癌种中的上下调节机制不同，同时还受癌症与身体其他器官的相互作用的影响。
在同一癌种的不同细胞系中，一个分子的表达可能会有所不同，是因为细胞系具有不同的生物学特性和调节机制，这会导致分子表达的不同。因此，在同一癌种的不同细胞系中，同一分子的作用可能也会有所不同。
Q：想要检测血液标本里面的 Hsp90 和氧化应激指标的表达，应该怎么做？文献里面好多都是用的 ELISA 的方法？有没有试过用 PCR 方法检测 mRNA 的朋友，求指教
A1：只要样本量够，就会选择 elisa 来测量呀，直接购买相应试剂盒，高效便捷，结果也精准。PCR 只适合量很小的去用，而且效率和容错率不行
A2：如果想要检测血液标本里面的 Hsp90 和氧化应激指标的表达，常用的方法是 ELISA 和 PCR。
对于 ELISA，它是一种蛋白质定量方法，通过对样品中 Hsp90 和氧化应激指标进行检测，以定量表达水平。
对于 PCR，可以通过检测血液标本中的 Hsp90 和氧化应激指标 mRNA 来评估它们的表达水平。需要先从血液样本中分离 RNA，再进行 cDNA 合成，最后通过 qPCR 或 RT-PCR 进行检测。
需要注意的是，不同的方法有不同的灵敏度、特异性、准确性等，选择具体方法应该根据实验目的、样本数量、预算等因素来考虑。
最后编辑于 2023-02-09 · 浏览 2271
