实验方法：尼氏(Nissl)染色

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尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。Nissl染色是以德国的精神病学家和神经病理学家Franz Nissl的名字命名的。

Nissl染色液染色后呈深蓝色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。

本Nissl染色液染色的有效成分是甲苯胺蓝。甲苯胺蓝可以和RNA或DNA结合，可以染色粗面型内质网上的核糖体，也可以染色细胞核。染色后使细胞体呈现斑驳的(mottled)蓝紫色染色。

1. 样品处理

a) 对于石蜡切片：

石蜡切片8-15um,二甲苯中脱蜡5-10分钟。

换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟；90%乙醇2分钟；70%乙醇2分钟；蒸馏水2分钟。

b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。

c) 对于培养细胞：

用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。

2. 尼氏(Nissl)染色

对于上述处理好的样品：

1.尼氏(Nissl)染色液56℃染色染色10-15分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）；

2.直接用95%酒精分化液分化数秒，镜下观察至尼氏体清晰为止；

3.迅速水洗，待稍干；

4.无水酒精脱水2分钟2次，二甲苯透明5分钟2次，中性树脂封固。（也可不用无水酒精脱水、二甲苯透明，水洗后吹干，直接滴加中性树脂封固）

注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。

显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。

注意事项：

1.        Nissl染色液的染色能力很强，并且染色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤和衣物等。

2.        需自备4%多聚甲醛、无水乙醇。如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。

3.        样品数量较多时，可以用染色架和染色缸，便于操作。第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。

4.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

猴脊髓神经元尼氏体