求助｜等度洗脱改为梯度洗脱，出峰早的物质峰高和峰面积变化很大。

等度的流动相为甲醇：1%醋酸=70:30，物质的出峰时间为1.6min，峰高约为1.2，与另一出峰较晚（5.8min）的物质峰高相差不大，峰面积比为1:2。后改为梯度洗脱，流动相A为1%醋酸，流动相B为纯甲醇。梯度为：0-2min，90%A，2-10min，变为95%B，然后高浓度有机相保持5min后回梯度。在此梯度下，两种物质的出峰时间向后推迟，分别为4.8和12min，4.8min的峰峰高相较于等度时大幅下降为0.3，峰面积从1:2变为约1:5。但是12min的峰相较于等度时峰面积与峰高变化很小。选用220nm的波长，但也比较了其他波长，也是相差很大。

为什么出峰早的那个物质会有这么大的变化，应该如何调节，才能让它保持与等度相似的峰高和峰面积？

等度和梯度洗脱的图谱对比：基线较平的是等度。