WB问题小汇
yj1984ren 推荐这个帖子发布于 4 年零 13 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近看到不少同学在做WB时遇到了不少不是问题的问题，这里汇集解答一下：
1.检测灵敏度：DAB或TMB（沉淀型）可检测到1～2ng抗原，ECL号称是10倍或100倍（超敏）于TMB显色，所以大家别拼命地增大目标蛋白的上样量了；
2.一抗：如果购买商品化的一抗，一定要认准可识别线性表位的一抗，即品牌商明确了可以做WB的，如果是自己拿抗原免疫取得的抗血清，一般都可以做WB；
3.丽春红染色：个人认为大可不必用它来判定转膜情况，因为它的灵敏度弱爆了，完全可以上个预染Marker，转到膜上直观明了，还可以在后期分析时知道自己的目标物是否正确；
4.转膜时间：一般地恒流160mA，90分钟，基本上各种大小的蛋白都可以完成转移，大家可以在此基础上加减；另外，有的蛋白的转膜可能会受SDS影响，转膜液我一般都不加SDS；
5.其他问题：慢慢补充吧。
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