请教鱼藤酮皮下注射帕金森模型及western问题

dxykksh

我们采用鱼藤酮0.125g溶于1mlDMSO中然后再溶于49ml的葵花油中，注射大鼠3mg/kg/48h,60天，但是目前大鼠在一个月左右表现明显体重减轻，死亡率也很高，大鼠到后期不吃饲料，90只大鼠最后60天仅剩20只左右，我们查阅了文献鱼藤酮注射中会有反应比较明显的阶段，过了那一段时间会好一点。确实也感觉在一个月左右死亡率很高，请问大家有没有比较合理的改进方法，是按原剂量调整到30天，还是减轻剂量改成1.0－1.5mg/kg/d呢，也看了有相关文章小剂量每日皮下注射鱼藤酮建模成功的，或者有没有更好的方法？

第二个问题是关于western的问题，我们提取了纹状体和黑质，但由于实验室酶标仪坏了，只能大概加了裂解液混合物(ripa.磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂)，纹状体加了600微升，黑质加了600微升，准备跑出内参根据灰度值调整上样量。但是最近跑的蛋白存在问题，不清楚是不是裂解液加的太少，下图第一张th蛋白上样量30微升，4个泳道，可能太大连在一起，第二张第三张减少了上样量，20微升，4个泳道还是连在一起，感觉还有些扩散，不知道哪里有问题。

3.想问一下大家关于纹状体和黑质加的裂解液都是多少μl

4.a-syn的蛋白我偶尔才能跑出来，不知道是不是因为十几kd.而我的转膜时间为200ma,65min。转膜时间太长了吗？

想问下大家关于a-syn的转膜条件都是多少？

5.关于动物实验，由于没有酶标仪，只能等蛋白跑出内参再根据内参调整，但是等我跑出内参，蛋白就不多了，是否可以相同组动物蛋白提取完毕后混在一起？另外如果可以和在一起，我们测的行为学实验是单个大鼠的，有什么影响吗？

谢谢大家!救救孩子吧！！！