【求助】高手－关于质粒构建问题

本人正在构建质粒,想把一个目的片断连到载体pcDNA3.1+上（CLAI单酶切），但是每次都是测续不成功。我的大概步骤如下：
1.PCR扩增目的片断
2.CLAI酶切目的片断和载体，然后纯化
体系:a.claI 1ul ； b.10 ×buffer 2ul ；c. 核酸 ；d定容到20ul
30度 3h
3.去磷酸化：讲载体去磷酸化，然后纯化
4.目的片断和载体3：1连接 22度 3小时
5转化，种板，过夜
6挑克隆，摇菌，提质粒，酶切鉴定有东西
7测续 不成功（3次送样） ，都说没有信号（上海博亚公司，和北京奥科公司都测过）
不知道哪出问题了，请教告诉指点，急！！！！

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