细胞培养经验介绍-LNCaP

人前列腺癌细胞;LNCaP
贴壁生长
R1640+10%FBS

图1

图2
图片来源:国家实验细胞资源共享服务平台
http://www.cellresource.cn/fcellpicture.aspx?pic=PUMC ——人前列腺癌细胞;LNCaP%E3%80%80
疑难细胞:培养基虽然不特殊,但是贴壁特别困难,遇到的问题就是大量细胞团漂呀漂,怎么都不贴。
解决方案:耐心再耐心!!!
我的经验是:
传代72小时一定一定不要动,同时减少培养箱开关次数,基本原则就是不要晃,让细胞安安静静地贴壁。72小时后将未贴壁细胞离心,弃上清,重悬入新瓶(2),原瓶(1)换液。再72小时后将未贴壁细胞离心,弃上清,重悬入新瓶(3),原瓶(2)换液。最终效果,一般,细胞贴壁情况3瓶>2瓶>1瓶。
将三瓶细胞继续培养,如果有漂的细胞团继续按上述处理,直到细胞长到80%后传代,之后细胞贴壁情况就会有所改善了。
记住!这三瓶传代是要充分消化的,因为重铺时并没有消化,容易成团生长,如图1那样。消化开了,就如图2那样,赏心悦目!
还要记住,但凡冻存再复苏,均要经过此步骤。所以养一批尽量把实验做了吧,谨慎冻存,但其实长时间在外面传也是不好滴!这个度自己把握吧,问我在外面传多少代会变异?我也不知道,哈哈哈哈……
这株细胞是挺难养的,需要挺大耐心。如果培养箱二氧化碳浓度可以调至8%,而且血清质量非常之优质,对细胞贴壁还是含有帮助的。72小时也不是绝对的,其实培养基要是不黄的话,4、5天不管也没事,T25瓶子,培养基放个10ml,慢慢长着,可能长得更好。
收集细胞消化再贴壁,我也试过,虽然细胞铺的时候比较分散,但是感觉没有上面那个方法细胞恢复的快,毕竟消化(尤其还消化不好)还是有损伤的。
有战友问到康宁瓶子的问题,康宁进口瓶子贴壁贴的要好一些,其他瓶子也是可以的,但是要注意每次传代要用新瓶,不然贴壁不紧,不利于细胞生长。