求助，关于PBMC中CD8+T胞内流式染色问题
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我需要检测PBMC中CD8+T细胞中胞内分子表达。遇到的问题1、CD8+T细胞总是分三群 2、在细胞固定破膜后，胞内染色总是染不上
流程如下:
1、收细胞后用PBS洗一遍，400g离心,5min,弃上清，回流液大概剩100μl，振荡混匀,加入抗体CD3-Percp、CD8-APC，4℃，孵育25min后，加入1ml PBS洗一遍，弃上清。
2、回流液剩余大约100μl, 加入固定液200μl，室温20min固定
3、孵育结束后，加入1＊破膜剂，室温下400g离心5min，弃上清
4、再次加入1ml1＊破膜剂，室温破膜10min后，离心弃上清
5、回流液大约剩100μl，振荡混匀，加入胞内抗体，4℃孵育25min
6、孵育结束后，加入1ml PBS,400g离心洗去未结合抗体，再加入400μl PBS上机检测
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2221
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