求教!急!qPCR细胞内参跑不出来,复工之前都没问题!
求教!急!最近提取小鼠肝细胞AML12的RNA 进行逆转,之后荧光实时PCR。在居家办公之前,内参MPPIA的Ct值有18-19左右,target gene大概26-28左右,都有比较好的扩增曲线和溶解曲线。但是自复工以来,同样提取得到的RNA,逆转之后跑实时PCR,内参MPPIA的Ct值都已经33以上,甚至高于35,或压根undetermined;target gene全部都是undetermined,溶解曲线根本不规则。
同样的手法,同样的Trizol提取方式,实在不知道是怎么回事了。目前出现这种情况已经三次,用别人的RNA sample可以跑出内参及target gene。所以怀疑是RNA样品出问题,但是今天又一次仔仔细细用Trizol提取RNA,包括*头重新灭菌,所用试剂全部换新的,再三确定无误,结果依旧不行,内参已经30好几,target gene依然undetermined。注:RNA浓度有300ng/ul左右(溶于20ulDEPC),260/280有1.8左右。
求各位大神能帮忙想想主意!已经3次了。。同实验室的前辈也不知道是什么原因导致。。希望有想法的大神们能指点一二啊!拜谢!
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2736