his标签蛋白不挂柱及复性后蛋白纯化问题
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大家好，目前在做一个蛋白，设计了两个质粒，分别将his标签安放在蛋白的N端和C端进行大肠杆菌表达，表达后8M尿素溶解包涵体进行钴柱纯化，都有大量包涵体，但问题是，在进行WB对his标签进行检测时，只有his在C端的蛋白可以出现阳性结果，而在N端的蛋白检测不到，两个蛋白是在同一个胶上交叉上样的并重复过，所以应该不是WB的问题，有没有大佬遇到过这种情况，是什么原因造成的呢？
另一个问题就是我镍柱纯化后的包涵体蛋白进行复性，其中含有200mM的精氨酸，复性后的蛋白中应该含有成功的蛋白，但我用镍柱进行纯化发现并不挂柱，是因为精氨酸的问题么？如何能够稳定的去除精氨酸或纯化出蛋白呢？超滤置换缓冲液或透析置换尝试过，感觉都有会沉淀产生。
希望能够有大佬答疑解惑，谢谢大家
