关于细胞污染的科普贴

“大佬们帮我看看我的细胞这是污染了吗？”

“大神，请问我的细胞是不是污染了，是什么污染呢？”

“救救孩子吧，我的细胞怎么了！”

养过细胞的朋友们一定会有这样的时刻，捧着被污染的细胞感叹：“细胞真是太难养了。”

细胞真的这么容易污染吗？

是真的，而且一旦污染就很难抢救回来，更严重的是一个细胞的污染可能会导致实验室内细胞全部受到影响。

常见的细胞污染类型包括细菌污染、真菌污染和支原体污染，养过细胞的小伙伴基本上都遇到过，有时候可能无法区分是哪种污染，下面让我们一起来了解一下这三种常见污染吧。

1、细菌污染

细胞受到细菌污染后，培养基会变得浑浊，算是比较容易发现和辨别的污染类型。也有的培养液肉眼观察没有太大差别，但是在显微镜下能观察到细胞的形态有变化，镜下会有小黑点且有规律的运动（黑胶虫）。

引起细菌污染的原因一般是实验过程中操作不当，常见的细菌污染有枯草杆菌和大肠杆菌。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。

2、真菌污染

常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、白色念珠菌和酵母菌。真菌污染时细胞培养液一般不会变浑浊，但在显微镜下可以观察到各种形状的菌丝。像念珠菌和酵母菌则会呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（如上图）。

真菌污染后，细胞生长变慢，最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。真菌生长的比较慢，不那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

3、支原体污染

在细胞培养过程中，支原体污染发生率高达63%，但细胞被支原体污染时，其生长率一般不会发生显著的影响，所以支原体污染与细菌、真菌污染相比较更难以察觉。当你发现你的细胞形态发生改变、细胞状态变差的时候就要小心一点了，你的细胞很可能被支原体“玷污”了，除此之外，细胞膜周围和细胞间隙之间会出现很多不动的小黑点，当你看到这些小黑点的时候，基本上就可以“确诊”了。

培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。

一旦细胞发生污染，就很难抢救回来，就算勉强救回来了 ，细胞状态也会受到影响，所以对待细胞污染，还是要以预防为主哦。

注意事项：

1、要保证实验室和培养箱的洁净，按时杀菌，可以用酒精擦拭和紫外照射的方法。必要时可以通臭氧过夜。

2、新到的细胞、培养基、血清都可以做一下简单的污染检测后再开始实验。另外要注意每次试剂量配制不宜过多，建议分装使用，分装时用针头滤器过滤一次。

3、进行实验操作时一定要按照实验室的要求，确保无菌操作。准备好细胞房专业连体洁净衣，戴好口罩和手套。所有进超净台的物品最好都用酒精擦拭一遍，超净台里面的东西一定要尽量少放，东西太多会影响超净台内空气流通及空气除菌

那如果细胞已经确认污染了，该如何急救呢？附上从丁香园上大佬那借鉴来的急救方法：

1. 判断污染源：一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？

2. 及时处理：若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配完全培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。

注：若条件允许，细胞污染后最好的处理方式是：丢弃！！！

1　 若为霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48h后污染未再次出现即可。

2　 若为真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150μg/mL培养2~3代

3　 若怀疑支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。

很多人把自己培养的细胞称为宝宝不是没有道理的，因为细胞确实就是这么的脆弱，但是只要我们做好预防，用心仔细，大多数细胞污染是完全可以避免的，最后，祝大家的细胞宝宝都健健康康的生长，然后献身于伟大的实验事业！