dxy logo
首页丁香园病例库全部版块
搜索
登录

细胞污染半个月~黑胶虫感染?

发布于 2022-06-20 · 浏览 6010 · 来自 Android · IP 江苏江苏
这个帖子发布于 2 年零 316 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

大家好,如题所示,共用一个细胞超净台的同学细胞都被污染了(台子由M组,Z组,还有我们组共用)。起初,M组的A同学的原代细胞污染了。隔天,A同学的师妹的细胞也遇到一样的情况。紧接着,我和我师妹的细胞也接二连三的污染了。那个时候我们就觉得是超净台和枪有问题,因此就清理了超净台,并且用75%酒精擦枪。超净台和房间都开紫外照着,大概照了一下午。

经过这次大清理,心想环境应该没有什么问题了吧。复苏的时候,水浴锅里的水也换新的双蒸水,操作的时候也很小心。翌日,显微镜下观察细胞的状态还挺好的,心里也很开心,等到细胞长得差不多,就进行传代了。当天,我把细胞从2个T25培养瓶传到2个6孔板,和1个T25瓶。隔天,我去观察的时候,发现细胞的状态怪怪的,没有以前形态那么好,像是老化的状态,显微镜下也看到有小黑点的存在。我就找老师确认,老师说有小黑点说明细胞就是被污染了。通过丁香园发现很多园友的细胞都出现过小黑点,有人称小黑点就是黑胶质,当黑胶质变多了会变成小黑虫。关于黑胶虫众说纷纭,现在也还没有证实。如Fig1,事实上小黑点比这个多,这个图片不怎么看的出来。

img

Fig1:细胞与细胞间隙有小黑点。

然后我就开始空培我的完培(买的现成的),Pbs,和明胶。变量是枪和注射器。

(1)我准备了6个中皿,(不用6孔板的原因是:防止相隔的孔之前会传播污染)完培,Fbs,明胶都是之前分装倒到50ml离心管里的。第一组:用枪来吸完培,pbs,明胶分别加到3个皿当中,做好标记。第二组:同样的,用注射器来吸取完培,pbs,明胶到另外3个皿当中,做好标记。第一天的时候,我发现用注射器来吸取液体的时候,完培,fbs,明胶没有出现污染的迹象(我说的污染是培养液出现小黑点)。但是用枪来吸取液体的完培,Fbs,明胶就已经发现细胞污染了,培养基已经出现一片一片的小黑点聚集,因为我把空培试剂都丢了,没有来的及拍照。所以,这一次,我怀疑是50ml离心管里的试剂被污染了。

(2)针对以上的问题,我大胆猜测,原先50ml离心管里的试剂被污染了,因此,我从原本500ml的完培和Pbs里重新分装到15ml离心管里,0.22um的滤器过滤。按照上述(1)的方法,我重复了一次操作,还是发现一样的问题。那么,问题来了,这么说大瓶的完培和Pbs也被污染了吗?

(3)因为做原代的M组同学的细胞最先发生污染,然后接二连三的我们的细胞也污染了?会不会源头就是这些乳鼠身上的支原体,衣原体呢?其中一个师妹的细胞鉴定为黑胶虫污染,视频如下

previewplay video

综上,希望有经验的前辈能指导一下,不知道问题出在哪里!万分感谢!

最后编辑于 2022-06-20 · 浏览 6010

19 15 3

全部讨论0

默认最新
avatar
19
分享帖子
share-weibo分享到微博
share-weibo分享到微信
认证
返回顶部