重叠PCR第二轮一直不成功 救救孩子吧!

我有两个基因，一个2112bp一个1628bp，中间用连接肽连接，有80bp的重叠。第一轮PCR结果显示正确，第二轮想要把两个中间有重合的片段连在一起，却怎么改进条件也出不来，酶用的是takara的Prime STAR HS DNA Polymerase高保真酶，第一轮PCR产物作为模板，因为无法定量所以稀释了10倍，100倍，1000倍。体系为模板1微升，引物各1微升，酶1微升，dNTP mixture 4微升，5*Prime STAR Buffer 10微升，水补足50微升。程序为98度3min,98度20s,56度10s,72度3min,72度5min,第二到第四步30个循环。结果如下：

模板不稀释的出现弥散，稀释的没有结果。再多次改进后，包括调退火温度，用两步PCR,不是没有条带，就是在最下面出现特异性条带，类似图二。

因为才研一，也看了很多帖子，但实在是不知道哪里出了问题了，请各位帮忙看看，不胜感激。