CD31小鼠脑部免疫荧光问题

我做了cd31(ab28364）的冰冻切片免疫荧光实验可是老是有问题。各位同志麻烦帮忙看一下是什么情况。或者有做出来的小伙伴，可以提供一下成功的经验吗?

我的步骤如下

1.柠檬酸钠修复，85℃，30min

2. 0.4％pbs–t(40μl triton x-100+10ml pbs)，30min

3.pbs 3×5min

4..一抗(1:100)，室温先在摇床上摇30min，然后4℃过夜。

5.pbs 2×5min

6.二抗(驴抗兔，ab150073，1:500)，室温2h(摇床0.5h，静置1.5h)

7.pbs 2×5min

8.DAPI 10min

9.pbs 5min

10.封片

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不应该是绿色荧光的，可是红色也有。