Overlap PCR相关问题，真诚请教
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各位专家们好，我正在构建一种质粒。需要插入三个片段：A片段约600bp，B片段约750bp，C片段750bp左右，我已经分别合成了A.B.C片段，从凝胶图上看是正确的，之后我Overlap B with C，凝胶图上看正确，送测序也正确，但之后我再用neb DNA hifi assembly 将A片段，B-C片段和质粒连接转化后提出的质粒一直没有条带（几乎没有任何条带），然后我换了一种思路想先将A.B.C连接起来，于是我Overlap A with B-C，但凝胶图上无目的条带，如下图：五六七列是之前提取质粒直接跑胶的图，二列是Overlap A with B-C（应该是2000bp左右），三列是B-C（做对照），一三列是marker
有点啰嗦了，请大神们指导，感谢！
提问中如果有表达不清楚，请指出，我努力补充
