冰冻切片,BrdU染色背景很高
发布于 2018-06-11 · 浏览 4658 · IP 广东广东
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实验小白，最近在做冰冻切片染色。使用的是20个月的C57小鼠，做小鼠脑部细胞增殖实验。腹腔注射8天的BrdU,但是染色结果背景高，非特异性较强。表示做实验做到心态爆炸。做了10个样本了，但是一直做不出来结果。要疯了。简略步骤如下：
1、腹腔注射BrdU,8天。
2、灌注，生理盐水50毫升，4%多聚甲醛60毫升。
3、放置1小时后，取脑。
4、4%多聚甲醛后固定12小时。
5、30%蔗糖（PBS配）糖沉。
6、冰冻切片。
7、1.5N盐酸室温处理30分钟。
8、PBS洗3次，每次2分钟。通透5分钟，PBS洗三次，每次2分钟，封闭20分钟。
9、一抗,1:400，过夜。
10、PBS洗2次，每次2分钟。
11、二抗（荧光染料）1:800，室温1小时。
12,、PBS洗3次，每次2分钟，封片
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 4658
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