心肌缺血模型TTC染色染不上

研二在做关于心肌缺血模型 心脏冷冻切片后在百分之二的TTC溶液中染色20min 但是染不上 但是心电图上确实缺血了是因为再灌注的事情染不上吗还是我欠缺了别的步骤 心脏取下来之后直接冷冻后染不上 把心脏血挤干净洗了几次还是染不上 是什么原因？我结扎的部位是心耳下面那个血管。