鼠尾鉴定pcr电泳,涂布条带多次重复出现,对照引物可正常P出结果 涂布条带究竟是何原因导致?求助各位指点迷津
某敲基因小鼠煮鼠尾碱裂法提DNA鉴定基因型,平时结果如下,基本上都能P出来。 所用引物和pcr程序也是实验室师兄流传下来长期使用的。
不知何时开始出现如下情况,P出的结果很少,并且每孔出现明显的涂布条带(还是引物二聚体?) 但勉强还能出些野生条带 纯合条带。
想着换个公司订批新的引物,再P,结果新引物更加糟糕。彻底不见条带了。 新的天一辉动引物和旧的擎科引物现在都P不出来了。
拿双敲除小鼠的DNA样品,同时鉴定两个目的基因。结果另一基因型鉴定非常正常。 说明我的操作和DNA样品都没问题呀。 问题只可能出在引物自身和pcr程序上吧。但原先我一直都是能跑出结果的。
试着提高退货温度,依旧不行。试着减少循环次数,依旧不行。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.6 万