低表达的基因的 real-time PCR 的难题
这个帖子发布于 19 年零 352 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我在研究一个低表达的基因， 现在用real-time PCR来检测它的表达量。我使用QIAGEN一步法Tapman，并由QIAGEN给设计的primer and probe。ABI 7900。
我面临的问题是，该基因的起峰很晚，33-35 cycle。很多人说大于30 cycle的，就几乎不可靠了。
我尝试加大template的量，但是效果不明显。试想，如果我要把起峰cycle提高到25cycle,那么我的template的浓度就要提高2的10次方，即1024倍。这显然是做不到的。
请问各位，对于低丰度基因的real time PCR，有什么好的办发嘛？
我面临的问题是，该基因的起峰很晚，33-35 cycle。很多人说大于30 cycle的，就几乎不可靠了。
我尝试加大template的量，但是效果不明显。试想，如果我要把起峰cycle提高到25cycle,那么我的template的浓度就要提高2的10次方，即1024倍。这显然是做不到的。
请问各位，对于低丰度基因的real time PCR，有什么好的办发嘛？
