关于建立AD细胞模型的感想与疑问

  建立阿尔茨海默病（细胞）模型的方法可以搜到很多，但基本没有看到建模比较成功的案例，由于最近一直在做AD细胞模型，所以想分享一下失败的感想并提出一些疑问，目的是让建模成功的战友多分享下经验，将方法传承下去，让大家少走些弯路。

   首先先提出一些疑问：1、为何文献中一般只说用多少浓度的Aβ作用于细胞多长时间，建立模型，但都没有说如何检验模型是否成功呢？检测的标准又是什么。   2、用于造模的细胞分化程度也不描述（PC12）不同分化得多细胞培养条件及对药物的敏感性差异不同。 3、种板时（96孔）文献中的密度大致都为10000左右/孔，细胞这么多真的合理吗，药物的损伤作用真的这么强吗？ 4、Aβ老化后如何检验其成为寡聚体了？投射电镜？老化后就一定有毒性吗？老化的时间五花八门哪个更合理？ 5、我做MTT筛选Aβ浓度时，细胞形态明显变差，但测OD值还是很高不知大家是否也遇到过这种情况，这些都是我做实验时的一些疑问，还请有经验的战友多多指点。 

   关于建模的细胞系用的最多的要数PC12（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）细胞和SH-SY5Y细胞。本人用的是PC12 细胞，它分为未分化、低分化、高分化三种，我养的是低分化的、细胞比较好养  DMEM（H）+10%FBS+1%双抗，感觉这个细胞喜欢群居，如果分瓶时瓶内细胞过少十分不愿意长，所以建议一分为2比较合理，另外要注意细胞的代数代数越高越向高分化转变。（下面会上传细胞照片，感觉它已经有点分化了）。低分化的细胞悬浮生长，需要多聚赖氨酸包被及神经生长因子诱导，但中文的文章一般都不具体写。 造模时最好用无血清或低血清的培养基饥饿处理一下，因为我的实验表明Aβ 的毒性貌似真没有文章中描述的那么大，有血清会干扰药物的作用。 关于药物的配制我是按照文献中方法在温箱中老化数天，使其成为寡聚体，但我没有检测它是否成为寡聚体（药物很贵）。使用MTT法确定浓度时，可以看到随着浓度升高细胞的状态变差，但测IC50时还是很高（没有污染）不知原因为何，最近使用实时无标记细胞分析仪做了一下，想看看损伤情况但结果也是很差浓度达到80umol都没有看到明显损伤，所以都开始怀疑这个药物是否真的有毒性，是不是药物老化时出了问题，还请有成功经验的战友多指点，感激不尽。   还请大家多多讨论！！