求助，小鼠腓肠肌切片染色出现空泡问题

本人想做小鼠腓肠肌免疫荧光染色，效仿文献的做法，采用速冻法：将小鼠行心脏前灌注4%PFA，再取腓肠肌放在盛有OCT的模具，再放入液氮中速冻，-80°C冰箱保存，再行冰冻切片，切片马上在4%PFA溶液浸泡20min，再做HE染色。结果如下：肌细胞内出现大量圆形空泡。咨询相关人士说是冰晶形成。

遂改良方法，直接将腓肠肌投入液氮中待其冷冻以来，再浸泡于OCT中再次投入液氮速冻，切片染色后还是有大量冰晶形成。

求问各位大神指出问题所在，并指导进一步做法，不胜感激！

PS: 尝试过 心脏前灌注PFA——取材后浸泡PFA 4-8h——蔗糖脱水——冰冻切片——染色，此做法没有冰晶形成，但肌纤维失去了毗连结构，细胞与细胞之间分离得很看，严重影响观察。