【求助】动物椎间盘RNA提取

各位前辈，小弟新手，最近在提取动物椎间盘组织（-80冻存4月左右）遇到困难，恳请各位大神能不吝赐教，我是用Trizol法提取的，组织量大概有绿豆大小，在加入异丙醇后，离心发现沉淀较多，略显暗黄，明显不像细胞提取时的羽状沉淀，乙醇洗后，加DEPC水溶解，呈凝胶状（黏黏的感觉），测得A260/280在1.2-1.5左右，A260/230在0.2-0.5左右，浓度也很低，后在论坛里看到有人说：在加异丙醇时加入高盐溶液可去除杂质，试了一下，离心发现沉淀明显减少，可是去除上清后，加入70%乙醇后，沉淀明显增多，离心清洗后检测，与之前未加高盐溶液的结果差不多；后有改用试剂盒提取，结果测得基本没有RNA，很是郁闷，同样的试剂盒用同样的步骤提取细胞的完全没有问题，尝试近3周，仍未找到好的方法，恳请各位前辈能够给予指点：1、动物椎间盘组织提取用什么方法较好。2、如何用Trizol法提取有什么要特别注意的。3、对于里面的杂质应如何去除。4、如果杂质不能去除，就这样直接进行下面的反转录，qPCR，对结果影响是不是很大。不胜感激！