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【求助】请教高手如何选择合适的shRNA真核表达载体?

皮肤科医师 · 最后编辑于 2022-10-09 · IP 重庆重庆
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这个帖子发布于 20 年零 96 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我想使用RNA干扰方法沉默原代培养的人成纤维细胞线粒体的一个结构蛋白的基因,准备采用构建shRNA真核表达载体的方法进行,选择载体时遇到了以下问题:
1、哪种载体适合于转染人原代培养成纤维细胞?
2、哪种载体可以在细胞内长期表达shRNA?(因为是结构基因,所以我希望干扰效果尽可能持久,以期观察到是否有明显的表型出现)
3、质粒载体的干扰效果一般可以维持多久?有无必要选用腺病毒载体?
4、带有GFP的载体是否可以不设(看家基因)阳性对照?GFP在细胞内表达是否会影响细胞的生物学功能?

请高手大侠们根据我的实际情况给些建议吧,先谢过了。





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